大鼠肺動脈平滑肌細胞是從大鼠肺動脈組織中分離出的關鍵結構細胞，在調控肺血管收縮與舒張功能中發揮核心作用。
 

　　大鼠肺動脈平滑肌細胞培養要點：

 

　　培養基與條件
 

　　基礎培養基：DMEM/F12(1:1)或DMEM高糖型，含10%胎牛血清(FBS)、1%青霉素-鏈霉素雙抗。
 

　　培養環境：37℃、5% CO?、飽和濕度。
 

　　換液頻率：每2-3天換液一次。
 

　　傳代方法
 

　　消化液：0.25%胰蛋白酶(含EDTA)。
 

　　操作步驟：
 

　　吸棄培養基，PBS漂洗2次。
 

　　加入胰蛋白酶消化1-2分鐘，鏡下觀察細胞收縮變圓后終止消化。
 

　　吹打形成單細胞懸液，1000rpm離心5分鐘。
 

　　重懸后按1:2比例接種至新培養瓶。
 

　　純化與鑒定
 

　　差速貼壁法：通過貼壁特性差異去除內皮細胞和成纖維細胞。
 

　　免疫熒光鑒定：傳代至第2-3代時，采用α-SMA免疫熒光染色，陽性率≥90%為合格。
 

　　注意事項
 

　　無菌操作：全程在超凈工作臺完成，避免支原體/細菌污染。
 

　　消化時間：消化不足導致細胞釋放少，過度消化損傷細胞活性，需鏡下實時觀察。
 

　　溫度控制：PBS、消化液、培養基需預溫至37℃，避免低溫刺激細胞。
 

　　動物選擇：優先選擇幼齡大鼠(8-12周齡)，老年大鼠肺動脈組織纖維化嚴重，細胞活性低。